从分子免疫及预后视角分析EGFR阳性N [复制链接]

研究背景

肺癌是一种由多种与临床相关的分子类型和组织学类型组成的复杂疾病。在美国，15%的肺腺癌患者中检测到EGFR突变，最常见的突变发生在外显子19和外显子21[1,2]然而中国肺癌患者群体中EGFR突变的比例与其他地区有很大差异。既往文献报道EGFR不同位点突变可能与酪氨酸激酶抑制剂(TKI)以及免疫检查点抑制剂(ICIs)的疗效相关，因此有必要对EGFR不同位点突变进行细化分析。此外，肿瘤免疫微环境（TIME）在肿瘤进化中也发挥重要作用。越来越多的研究表明癌细胞与TIME的成分密切相互作用，TIME的特性也会影响肿瘤对免疫治疗的响应。有个别研究报道了在驱动基因阳性的NSCLC患者中尝试免疫检查点抑制剂（ICI）的适用性，这些研究提示，某些EGFR突变亚型的NSCLC患者群体可能具有ICI适用的潜力。此外TIME中的成分（如CD8+T细胞）在几类肿瘤中的预后意义也已被报道[3,4]。在适应性免疫细胞中，肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）也已被广泛探索[5]。既往诸多研究证据提示，特定肿瘤微环境的成分和特征可被视为预测性生物标志物，并在一定程度上为ICI的潜在应用提供依据。因此，从分子、免疫以及预后视角分析我国EGFR阳性NSCLC患者群体的异质性具有重要意义。昆明医院、昆明医院的专家团队与思路迪诊断联手协作，针对上述问题进行了探索，尝试揭示具有不同EGFR突变的NSCLC的肿瘤分子突变特征和免疫学格局。现在，该研究已经见刊于FrontiersinImmunology（IF=8.）杂志。

中国人群EGFR突变比例

本研究通过分析名中国原发性NSCLC患者的数据来计算不同EGFR突变亚型的确切比例。如图1B中的饼图所示，51.3%的中国NSCLC患者中检测到EGFR突变。我们也评估了原发性NSCLC患者中不同亚型的EGFR突变（图1C），发现腺癌中的EGFR突变多于鳞状细胞癌和大细胞癌（图1D）。此外，我们还将研究中几种EGFR突变的频率与前瞻性MSKCC队列中的频率进行了比较[6]。

EGFR不同突变亚组

接下来，团队分析对比了EGFR不同突变亚组的NSCLC肿瘤免疫微环境特征，以期为ICI在不同亚组中适用ICI治疗的可能性提供理论依据。我们评估了有和没有EGFR突变的肿瘤之间免疫细胞浸润的差异。在CD8+T细胞、M1(CD68+HLA-DR+)肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、M2TAMs(CD68+HLA-DR-)、CD56brightNK细胞和CD56dimNK细胞中，相较无EGFR突变组，EGFR突变组中发现肿瘤实质中较少的CD8+T细胞浸润(p0.05)。在肿瘤实质中，与没有EGFR突变的组相比，只有19del组显示出较少的浸润CD8+T细胞（p0.05）（图2D）。对于某些EGFR突变亚型，发现肿瘤实质、间质和肿瘤实质+间质中CD8+T细胞的数量存在差异，例如，与19del和SI组相比，在EGFRGA/C/S突变组中发现肿瘤中更多的CD8+T细胞浸润（图2D）。

对于有和没有EGFR突变的患者

为了探索NSCLC的预后生物标志物，我们对98名术后NSCLC患者进行了随访。这些患者根据有无EGFR突变(EGFR-/+)、TMB水平、免疫细胞进行分层，免疫细胞包括CD8+T细胞、M1/M2巨噬细胞、CD56bright和CD56dimNK细胞等等。通过使用肿瘤浸润性免疫细胞的中位密度值为cutoff进行LogrankPFS分析分析。如CD8+T-high定义为所有患者中排序为肿瘤中CD8+T细胞密度中位值以上的患者，否则定义为CD8+T-low。根据结果，EGFR突变（图3A-5B）、TMB水平（图3C）、TIME成分（图3D-3H）中，仅CD8+T细胞与NSCLC不同的预后相关。具体而言，较长的PFS与CD8+T-high相关（p0.01）（图3D）。

我们进一步分析了TIME在有和没有EGFR突变的NSCLC患者中的潜在预后意义，并确定了在EGFR突变与否的患者中不同的预后生物标志物(图4A-J)。仅在没有EGFR突变的患者中观察到CD8+T细胞的预后意义（p0.05）（图4A）；而对于EGFR突变的患者，发现CD56dimNK-high组的PFS比CD56dimNK-low组更长（p0.05）（图4J）。因此，EGFR突变和EGFR野生型的NSCLC患者具有不同的预后生物标志物。

总结与延伸

综观本次研究，EGFR阳性NSCLC是一种复杂的疾病，研究显示了该类患者群体的遗传和免疫学异质性以及预后的差异。这些结果表明，具有不同EGFR突变的NSCLC患者在临床实践中应进行不同的治疗和管理。对于EGFR阳性的NSCLC患者，也不能排除ICI治疗。当然本研究结果还需深入证明，尤其是需要干预性研究的证实。

本研究使用了思路迪诊断的TIMEPro检测服务进行免疫微环境分析。这是一种mIHC检测，可在一张组织切片上实现针对多种不同生物标志物的染色标记，由于采用了新一代技术，相较于市面上流行的前代五标六色技术，TIMEPro最多可以达到六标七色，即一张组织片中可标记6个marker，加上染色细胞核的DAPI呈现蓝色，合计7种颜色，做到了对有限组织样本的充分利用。下图即为本次研究中所涉及的部分染色效果。

TIMEPro在进行mIHC染色过程中所使用的抗体全部来自Abcam、CST、安捷伦等国际知名抗体供应商，保证了染色效果的稳定可信。所使用的扫描设备则为第三代全自动扫描仪，相较于前代产品，无需人工干预，杜绝了人为误差；新一代的扫描设备还具备多光谱信号拆分技术，确保了扫描后图像的高质量，最大程度避免串色；最后，在进行定量定位分析时，还应用了人工智能算法，能够根据特征识别组织区域，进而对全景图进行自动分割、分类、计算，这使得计算结果更加精确，可重复性高。TIMEPro可以说是临床科研中的得力助手。